Kỹ thuật chuyên sâu

     Định lượng nồng độ virus trong máu được khuyến cáo sử dụng trong chẩn đoán, điều trị bệnh nhân nhiễm HBV và HCV bởi tất cả các hiệp hội gan mật và truyền nhiễm trên thế giới. Tất cả các bệnh nhân tham gia điều trị bằng các phác đồ kháng virus HBV, HCV đều phải định lượng virus trước và trong quá trình điều trị để theo dõi đánh giá phác đồ điều trị và tiên lượng kết quả điều trị

Nguyên lý kỹ thuật như sau:


                         

     Kỹ thuật TaqMan bao gồm một đầu dò oligonucleotide (probe) được gắn ở đầu 5´ một chất phát tín hiệu huỳnh quang (reporter) và ở đầu 3´ là một chất thu nhận tín hiệu (quencher). Probe được thiết kế gắn với trình tự đích của mầm bệnh ở giữa mồi xuôi và mồi ngược của phản ứng PCR. Ở giai đoạn gắn mồi, probe gắn đặc hiệu vào trình tự đích, khi đó tín hiệu huỳnh quang phát ra từ Reporter đều bị Quencher dập tắt. Trong giai đoạn kéo dài khi mồi xuôi của phản ứng được kéo dài đến vị trí gắn của Probe thì taq DNA polymerase sẽ phá hủy các liên kết gắn giữa probe với trình tự đích và đồng thời phá hủy probe, làm cho Reporter và Quencher không còn ở gần nhau. Kết quả reporter phát ra tín hiệu huỳnh quang và hệ thống máy realtime PCR sẽ thu nhận tín hiệu huỳnh quang phát này. Tín hiệu huỳnh quang thu được tỷ lệ thuận với nồng độ các probe bị phá hủy. Tín hiệu này tăng lên gấp đôi sau mỗi chu kỳ khuếch đại. Dựa vào tín hiệu huỳnh quang thu được của mẫu bệnh phẩm và các mẫu chuẩn, phần mềm sẽ tính toán ra nồng độ ban đầu của vật chất di truyền trong mẫu thử.
    HBV-DNA định lượng bằng taqman probe được thiết kế nhắm vào trình tự bảo tồn của vùng preS/S của bộ gen HBV cho phép định lượng nồng độ HBV-DNA trong mẫu thử của cả 10 kiểu gen khác nhau của HBV với độ nhạy và độ đặc hiệu cao. Xét sử dụng cặp mồi đặc hiệu và mẫu dò (HBsF, HBsR, HBsTaq) khuếch đại một trình tự đặc hiệu của bộ gen HBV khoảng 80bp nằm trên gene S. Xét nghiệm thực hiện trên  trên hệ thống máy Realtime PCR 7500 của ABI.
    Định lượng HCV-RNA sử dụng kỹ thuật Realtime PCR Taqman Probe nhằm xác định số bản copy của virus viêm gan C trong 1ml huyết tương của bệnh nhân nhiễm HCV. Mồi và probe được thiết kế trong vùng 5’UTR có tính bảo tồn cao của bộ gene HCV và khuếch đại một trình tự có kích thước 244 bp. Kỹ thuật cho phép định lượng HCV-RNA của cả 7 kiểu gen khác nhau của virus HCV.
           Ngoài ra tại Khoa C17 kỹ thuật realtime PCR được ứng dụng để phát hiện các mầm bệnh khác như lao, não mô cầu, HPV, HSV, CMV, EBV…


Liên hệ: Khoa Sinh học Phân tử
Điện thoại:  04. 62784169